期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
结肠癌肿瘤干细胞富集方案的比较
李伟男；李勇；李利发；周何；杨刚；钟晓蓉；冷政伟；李敬东
关键词：结肠癌, 肿瘤干细胞, 富集, 悬浮培养
摘要：目的 比较3种富集结肠癌HCT116细胞肿瘤干细胞(CSC)培养方案的效率.方法 含不同浓度生长因子的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)/F12无血清培养基(分为G1、G2、G3组)悬浮培养HCT116细胞14d获得细胞球,其中G1组方案:10 ng/ml上皮生长因子(EGF)+ 10 ng/ml成纤维细胞生长因子(bFGF);G2组:20 ng/ml EGF+ 10 ng/ml bFGF;G3组:20 ng/ml EGF+ 20 ng/mlbFGF.流式细胞术(FCM)检测细胞球中CD133+ CD44+、CD133+、CD44+比例变化及细胞周期变化;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞球中CSC基因(CD133、CD44、CD166、CD66c)mRNA表达变化;Sphere-forming assay检测细胞球自我更新能力变化;平板克隆形成实验检测细胞体外成瘤能力变化;CC K-8检测细胞增殖能力变化.结果 FCM检测3组细胞中CD133+细胞比例分别为0.167±0.025、0.233±0.031和0.030±0.010,差异有统计学意义(F=58.020,P=0.000);3组细胞中CD133+ CD44细胞比例分别为0.033±0.006、0.097 ±0.031和0.023±0.006,差异有统计学意义(F=14.233,P=0.005);FCM检测细胞周期结果:3组细胞Go/G1期比例分别为52.533±0.929,66.893±1.057和57.377±1.256,差异有统计学意义(F=134.945,P=0.000);3组细胞S期比例分别为35.770±0.799、32.443±1.110和34.463±0.396,差异有统计学意义(F=12.471,P=0.007);3组细胞G2/M期比例分别为11.697±0.527、0.533±0.117和8.163±0.872,差异有统计学意义(F=278.685,P=0.000).Real-time PCR检测结果:3组CSC基因CD133、CD44、CD166、CD66c分别为G1组:2.222±0.830、26.858±3.084、22.556±2.493和14.737±2.105,G2组:6.034 ±0.978、66.149±2.643、64.514±5.823和54.670±2.052,G3组:2.208±0.898、23.591±4.995、23.377±1.821和6.877±0.449;各组上述基因表达比较,差异有统计学意义(F=17.851、121.788、119.265、668.579).Sphere-forming assay检测结果:3组细胞形成细胞球分别为175.000±22.913、412.667±14.742和133.667±12.583,3组比较,差异有统计学意义(F=226.557,P=0.000).平板克隆形成实验检测结果:3组细胞形成克隆数分别为173.667±11.676、394.333±24.685和152.333±24.338,3组比较,差异有统计学意义(F=120.754,P=0.000).CCK-8检测结果显示,3组细胞在增殖24、48、72 h后吸光度(A)值分别为G1组:1.147±0.058、1.555±0.083、1.827±0.111,G2组:1.460±0.107、2.243±0.106、2.637±0.105,G3组:1.062±0.053、1.530±0.104、2.120±0.225,3组细胞A值差异均有统计学意义(F=22.217、50.795、20.360,P=0.000).结论 G2组方案更能有效富集结肠癌HCT116细胞的肿瘤干细胞.
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