期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
PiggyBac转座子介导的嵌合抗原受体修饰T细胞研究
郜宁；付玉龙；郑岩；张炳勇；李修岭；陈金秀；韩双印
关键词：PiggyBac转座子, 嵌合抗原受体, 电穿孔
摘要：目的 建立一种非病毒的T细胞基因转导方法,为CAR-T细胞免疫治疗提供基因修饰策略.方法 将CD19CAR表达框(1 470 bp)克隆人PiggyBac转座子载体PB513B-1的Xba Ⅰ和EcoR Ⅰ位点,构建靶向CD19的PiggyBac转座子载体(pb19CAR);将转座子和转座酶双质粒,经电穿孔仪(1×20 ms 830 V/840 V/850 V)和核转仪(U014/T023)转导原代T细胞,优化转导程序,比较两种转导装置的效率及细胞存活率;用靶抗原CD19蛋白(5μg/ml)和CD3/CD28 mAb(5μg/ml)两种包被平板激活、白细胞介素(IL)-2(500 U/ml)和混合细胞因子IL-7(10 ng/ml)/IL-15(10 ng/ml)/IL-21(20 ng/ml)两种扩增方法,比较激活、扩增、CD19CAR表达和细胞表型.结果 转座子载体(pb19CAR)经Xba Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切和基因测序确认构建成功.经流式细胞术及细胞活力计数仪检测,电穿孔仪转导效率及细胞活率均高于核转仪[(51.0±2.3)％比(36.5±1.8)％(P=0.000),(75.0±3.8)％比(60.0±3.0)％(P=0.000)];电穿孔后培养扩增12d流式细胞术检测CD19CAR表达显示靶抗原CD19蛋白组明显高于CD3/CD28 mAb组[(70.0±3.5)％比(54.0±2.7)％(P=0.000)]、细胞表型分析显示混合细胞因子组比IL-2组有更高比例的Tscm/Tscm-like(25.00±1.25)％比(12.20±0.60)％ (P =0.000)、Tcm细胞(10.20±0.51)％比(3.00±0.15)％(P=0.000).结论 pb19CAR/转座酶双质粒电穿孔具有较高的转导效率和细胞活率;靶抗原CD19蛋白刺激可优势扩增CAR-T细胞;混合细胞因子支持具有中央记忆和干细胞记忆表型的CAR-T细胞生长.
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