期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
Polo-like kinase 1短发卡RNA重组腺病毒载体构建及其生物学应用
李泉；毛永欢；余翔；蔡则灵；王伟林；喻春钊
关键词：Polo-like kinase 1, 短发卡RNA, 重组腺病毒, 胰腺癌, RNA干扰
摘要：目的 构建针对人类Polo-like kinase 1(Plk1)基因的短发卡RNA (shRNA)真核表达载体,并进行腺病毒包被.方法 设计并合成含有小发夹结构的Plk1 shRNA对应模板序列,退火并与pYr-1.1载体重组质粒;通过LR体外同源重组将pYr-1.1-Plk1-shRNA表达框构建至pAd-DEST腺病毒表达载体上;包装重组腺病毒;感染人类胰腺癌细胞BxPC-3验证干扰效率.实验分3组:对照组(Control)、空载组[rAd-增强绿色荧光蛋白(rAd-EGFP)]、实验组(rAd-shPlk1),实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测Plk1基因的表达,流式细胞术检测细胞周期的变化及对细胞凋亡的影响.结果 腺病毒感染BxPC-3细胞后,RT-qPCR检测Plk1 mRNA表达量:对照组1.047±0.315、空载组1.121±0.199、实验组0.119±0.050;Western blot检测Plk1蛋白表达量:对照组0.760±0.088、空载组0.743±0.101、实验组0.050±0.043,实验组较对照组及空载组Plk1mRNA和蛋白水平均明显降低(P＜0.01).流式细胞术检测G2期细胞比例:对照组6.077±0.056、空载组6.533±1.644、实验组33.427±7.774,实验组G2期细胞数比例显著高于空载组和对照组(P＜0.01).感染24h后实验组的细胞凋亡率明显高于空载组和对照组(P＜0.01).结论 成功构建包被有Plk1 shRNA的腺病毒表达载体,且重组腺病毒载体可以抑制Plk1基因的表达,引起细胞周期G2/M期停滞和促进细胞凋亡.
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