期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
三种大鼠肝细胞分离及原代培养方法的比较
杨友生；瞿祥春；胡松
关键词：肝细胞, 分离方法, 原代培养, 对比研究, 大鼠
摘要：目的 比较3种大鼠肝细胞原代分离培养方法的差异.方法 采用原位两步胶原酶灌流法(A法)、离体两步灌流法(B法)及剪切消化法(C法)3种方法分离大鼠肝细胞,采用血细胞计数法计数肝细胞产量,采用0.4％锥虫蓝染色观察细胞活力,Percoll分离液密度梯度离心法纯化肝细胞至活力在92％以上,然后接种于杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)-F12培养基中培养,糖原染色(PAS)法鉴定肝细胞,倒置相差显微镜观察肝细胞形态,定期收集肝细胞培养液上清检测葡萄糖、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及白蛋白的水平.结果 A、B、C法分离获得的肝细胞总数分别为(2.14±0.66)×108、(2.09±0.58) ×108、(1.16±0.03) ×108个/整肝,C法与A法对比差异有统计学意义(P＜0.01);A、B、C法获得的大鼠肝细胞活力分别为(93.80±4.68)％、(84.40±2.43)％、(38.95±4.89)％,B法与A法对比差异有统计学意义(P＜0.05),C法与A法对比差异有统计学意义(P＜0.01);培养液上清葡萄糖水平在3～11d维持在一个稳定水平;AST、ALT水平在培养3d后下降显著,6～9 d后维持在相对稳定的水平.白蛋白的分泌功能第7天达高峰,11d内维持在较稳定水平.培养液上清第7天上述生化指标,B法和C法与A法对比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 A、B、C3种分离方法均成功分离并原代培养了肝细胞,C法获得的肝细胞产量和活力较低.DMEM-F12培养条件下肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力,实验显示第5 ～11天为肝细胞体外功能研究的佳阶段.
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