期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
检测前列腺癌细胞PC3溶酶体膜通透化模型的构建
邢晨；孙岩；王文龙；高靖达；沙楠；徐浩；吴长利；胡海龙
关键词：溶酶体膜通透化, 串联红绿荧光报告基因, 前列腺癌细胞, 鞘氨醇, 凋亡
摘要：目的 利用串联红绿荧光蛋白报告基因的溶酶体膜蛋白来检测前列腺癌细胞溶酶体的变化,构建靶向溶酶体膜通透化(LMP)的筛选模型,为后续靶向溶酶体膜通透化的药物筛选奠定基础.方法 (1)设计构建串联红绿荧光报告基因标记溶酶体膜蛋白(Lamp2C)的真核表达载体pLamp2C-红色荧光蛋白(mRFP)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP);(2)荧光显微镜观察pLamp2C-mRFP-EGFP质粒转染入PC3细胞表达情况;(3)用LysoTracker Blue浓度为55 nmol/L的培养基孵育转染后的PC3细胞,共聚焦显微镜下观察pLamp2C-mRFP-EGFP与溶酶体共定位;(4)用40 μmol/L鞘氨醇的培养基处理转染pLamp2C-mRFP-EGFP的PC3细胞,共聚焦显微镜观察加入鞘氨醇前后红绿荧光的变化.利用Image J软件定量分析共定位和红绿荧光变化.结果 (1)pLamp2C-mRFP-EGFP真核表达载体构建成功;(2) pLamp2C-mRFP-EGFP瞬时转染至PC3细胞,EGFP及mRFP均正常表达;(3) pLamp2C-mRFP-EGFP与溶酶体共定位结果:Pearson's相关系数为0.8362±0.051 8;(4)经鞘氨醇处理前后,PC3细胞绿色荧光强度为0.1190±0.0223比0.0639±0.0156,明显减弱,差异有统计学意义(t=14.66,P＜0.05),红色荧光强度为0.104 9±0.010 1比0.1038±0.0109,差异无统计学意义(t=1.136,P＞0.05).结论 成功转染pLamp2C-mRFP-EGFP至PC3细胞溶酶体,鞘氨醇处理后绿色荧光明显减弱,红色荧光无明显变化,指示PC3细胞溶酶体膜通透化.
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