期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
微小RNA let-7c通过靶定细胞周期蛋白依赖激酶6抑制肝癌细胞增殖
公方晓；孙仁华；夏景林；杨毕伟
关键词：癌, 肝细胞, 微小RNAs, 细胞周期蛋白依赖激酶6, let-7c
摘要：目的 观察微小RNA(miRNA,miR) let-7c对肝癌细胞增殖的影响并验证其靶基因.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测人肝癌细胞MHCC-97L、HepG2、HCCLM3、SMMC-7721及人肝细胞L02中let-7c的表达.使用LipofectamineTM 2000脂质体将miRNA转染入HCCLM3细胞,设转染let-7c的细胞为let-7c组,转染阴性对照miRNA的细胞为对照组,空白组未进行转染,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测let-7c对细胞增殖的影响,流式细胞术检验各组细胞周期的差异,Western blot检测转染后细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)的蛋白表达情况.将CDK6的3'端非编码区(3'-UTR)连接入pMIR-REPORT荧光素酶载体,建成荧光素酶报告基因.将miRNA、荧光素酶报告基因、海肾荧光素酶质粒共转染入293T细胞,检测转染后荧光素酶的活性,验证1et-7c对3'-UTR的结合作用.结果 肝癌细胞MHCC-97L、HepG2、HCCLM3、SMMC-7721中的let-7c表达量均低于L02,表达量分别为(3.22±0.08) ×10-4、(2.34±0.11)×10-4、(1.85 ±0.03) ×10-4、(3.03±0.11) ×10-4及(4.37 ±0.09)×10-4(P ＜0.05).let-7c组细胞在转染后48、72、96 h的吸光度值均低于对照组及空白组(P＜0.05),而对照组与空白组比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染后72 h,let-7c组细胞处于G1期的比例为(56.95 ±2.40)％,均高于另外两组(P＜0.05),而另外两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染后48 h,let-7c组CDK6蛋白的表达量均低于另外两组(P＜0.05),而另外两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).双荧光素酶报告基因检测发现let-7c与对照miRNA比较,能抑制荧光素酶的活性(P＜0.05).结论 let-7c在肝癌细胞中的表达低于正常肝细胞,let-7c能抑制肝癌细胞的增殖,并使细胞阻滞于G1期,CDK6是其调控的靶基因.
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