期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ表达降钙素基因相关肽基因重组载体的构建与鉴定
王义生；李宁博；李劲峰；施佳辰；孙俊魁；李月白；赵国强
关键词：RNA干扰, 过氧化物酶体增殖子活化受体-γ, 降钙素基因相关肽, 重组载体
摘要：目的 构建与鉴定沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)同时表达降钙素基因相关肽(CGRP)基因重组载体.方法 选用pGFP-V-RS载体,将PPARγ小干扰RNA(siRNA)寡核苷酸靶序列连接入pGFP-V-RS载体,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ;将CGRP片段与Mlu Ⅰ酶切,并与末端羟基化的线性质粒pGFP-V-RS重组连接,得到重组载体pGFP-V-RS-exCGRP.将获取的CGRP基因片段连接入线性化重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP.收集第3代HEK-293细胞,将细胞分为4组:CON组:转染空载体pGFP-V-RS质粒,作为对照；SI组:转染重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ质粒；EX组:转染重组pGFP-V-RS-exCGRP质粒；DOU组:转染重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP质粒.每组电极杯中加入5x106个细胞,并分别加入上述质粒2.5μl,给予直流电低压脉冲1次,时间15 ms.培养48 h后收集各组细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot检测细胞内PPAR、CGRP mRNA及蛋白的表达.结果 重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP经酶切鉴定及测序结果与设计完全一致.电转染HEK-293细胞后,DOU组细胞PPARγ基因呈低表达,PPARγmRNA与其蛋白的相对表达量为0.036±0.003、0.108 ±0.031,与EX组(0.156±0.014、0.778±0.103)及CON组(0.148±0.014、0.742 ±0.143)比较,差异有统计学意义(P＜0.05),与SI组(0.054±0.005、0.135 ±0.039)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).DOU组细胞CGRP基因呈高表达,CGRP mRNA与其蛋白的相对表达量为1.144±0.106、1.244±0.184,与SI组(0.320±0.030、0.370±0.089)及CON组(0.444 ±0.041、0.274±0.062)比较,差异有统计学意义(P＜0.05),与EX组(1.021 ±0.095、1.221±0.181)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建出沉默PPARγ基因并表达CGRP基因的重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP,能够有效阻断PPARγ基因表达,同时促进CGRP基因表达.
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