鱼藤素抑制人胰腺癌细胞株Panc-1的增殖并诱导细胞自噬的发生

摘要：目的 观察鱼藤素在人胰腺癌细胞株Panc-1中的作用.方法 细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测鱼藤素对人胰腺癌细胞株Panc-1增殖的影响；碘化丙锭(PI)染色法检测鱼藤素对人胰腺癌细胞株Panc-1周期的影响；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)法检测鱼藤素对人胰腺癌细胞株Panc-1凋亡的影响；单丹(磺)酰戊二胺(MDC)和吖啶橙/溴乙啶(AO/EO)染色法检测鱼藤素对人胰腺癌细胞株Panc-1自噬的影响；Western blot技术检测鱼藤素对人胰腺癌细胞株Panc-1自噬蛋白及蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路蛋白表达的调节作用.结果 Panc-1细胞经不同浓度(0、10、25、50、100、200和500 μmol/L)的鱼藤素处理24 h后,细胞存活率分别为(96.21±0.30)％、(95.40±1.78)％、(94.21 ±2.43)％、(91.27±4.24)％、(86.14±3.10)％、(80.30±3.21)％、(69.54±3.36)％；Panc-1细胞经不同浓度(0、10、25、50、100、200和500μmol/L)的鱼藤素处理48h后,细胞存活率分别为(95.94±0.20)％、(93.46±1.66)％、(88.62±0.72)％、(80.16±2.64)％、(63.64±2.94)％、(49.87±3.50)％、(34.99±2.09)％；Panc-1细胞经不同浓度(0、10、25、50、100、200和500 μmol/L)的鱼藤素处理72 h后,细胞存活率分别为(94.50±0.14)％、(86.98±1.26)％、(70.87±2.87)％、(51.85±6.73)％、(33.16±6.33)％、(16.29±0.83)％、(6.01±0.45)％；经不同浓度的鱼藤素处理后,Panc-1细胞的存活率明显下降,呈时间-剂量依赖性(P＜0.05)；Panc-1细胞经不同浓度(0、10、25、50、100和200μmol/L)的鱼藤素处理24h后,G2/M期细胞比例分别为(13.98±2.31)％、(16.94±2.31)％、(22.61±1.79)％、(34.15±0.09)％、(43.01±1.45)％、(45.46±0.94)％；Panc-1细胞经不同浓度(0、10、25、50、100和200 μmol/L)的鱼藤素处理48 h后,G2/M期细胞比例分别为(12.32±0.80)％、(14.33±0.78)％、(25.72±3.27)％、(36.91±1.50)％、(44.35 ±0.82)％、(48.94±1.63)％；不同浓度的鱼藤素作用24、48 h后,Panc-1细胞G2/M期比例明显增加(P＜0.05).Panc-1细胞经不同浓度(0、10、25、50、100和200 μmol/L)的鱼藤素处理48 h后,对照组(0μmol/L)的凋亡率为(10.82±2.99)％,低浓度(10、25、50 μmol/L)鱼藤素处理组的凋亡率分别(11.88±2.40)％、(13.91±2.03)％、(17.28±3.67)％,与对照组比较,其促凋亡作用并不明显(P＞0.05)；高剂量(100、200 μnol/L)鱼藤素处理组的凋亡率分别为(24.80±2.92)％、(30.16±3.08)％,与对照组比较,有部分促凋亡作用(P＜0.05).MDC和AO/EO染色结果显示Panc-1细胞内的点状阳性结构和橘红色荧光明显增加；Western blot结果显示,鱼藤素作用后自噬关键蛋白Atg5、Atg7和LC3Ⅱ表达增加,而磷酸化Akt (p-Akt)、磷酸化mTOR (p-mTOR)表达减少；使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和氯喹(CQ)抑制自噬后,对照组的凋亡率为(11.26±2.89)％,3-MA和CQ处理组的凋亡率分别为(14.98±2.77)％和(18.10±3.03)％,100 μmol/L的鱼藤素引起的凋亡率为(22.37±2.45)％；分别联用3-MA和CQ后,100 μmol/L鱼藤素处理组的促凋亡率分别为(39.24±2.78)％和(55.53±3.25)％,与未加自噬抑制剂前比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 鱼藤素可以明显抑制人胰腺癌细胞株Panc-1的增殖,并通过抑制Akt/mTOR信号通路和激活相关自噬蛋白的表达,进而诱导Panc-1细胞发生保护性自噬.