期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
慢病毒介导的具有特定二级结构的microRNA-338-3p抑制剂的构建
邓海军；孙凯；郭琛；董泾青；李国新
关键词：结直肠癌, microRNA-338-3p, 慢病毒
摘要：目的 构建慢病毒介导的具有特定二级结构的人microRNA-338-3p (miR-338-3p)抑制剂并观察其对结直肠癌细胞侵袭转移能力的影响.方法 由miRBase数据库查找获得miR-338-3p成熟序列,设计目的基因片段并人工合成；将miR-338-3p抑制剂序列和pLV-THM载体经双酶切后连接,产生pLV-THM-miR-338-3p抑制剂慢病毒表达载体,双酶切后测序鉴定,筛选阳性克隆；以pLV-THM-miR-338-3p抑制剂、psPAX2和pMD2.G质粒共转染包装细胞293T,包装产生慢病毒并测定滴度.流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株,利用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-338-3p表达,Western blot检测其靶基因Smoothened (SMO)蛋白表达水平,Transwell小室穿透试验检测肿瘤细胞转移能力.结果 经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含miR-338-3p抑制剂的慢病毒表达载体,倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293T表达绿色荧光.稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株中,miR-338-3p表达水平显著低于阴性对照组(0.92±0.43比3.71 ±0.22,P＜0.01),SMO蛋白表达水平明显升高,且肿瘤细胞表现出侵袭转移能力的增强(细胞数78.6±6.9比23.7±4.2,P＜0.01).结论 成功构建了miR-338-3p抑制剂的慢病毒表达载体和稳定低表达miR-338-3p的SW-620亚细胞株,证实miR-338-3p可通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞转移.
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