期刊简介

               中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊,国家科学技术部中国科技论文统计源期刊,中国生物医学核心期刊,中华医学会外科学分会两本会刊之一,以“探讨理论,更新知识,指导科研,服务临床”为办刊宗旨,其内容包括外科各个专业,是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来,本刊立足外科前沿,评论医学资讯,报道实验外科最新科技成果,内容新颖,信息量大,杂志被引频次与影响因子逐年增加,已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。                

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  • 杂志名称:中华实验外科杂志
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中华医学会
  • 国际刊号:1001-9030
  • 国内刊号:42-1213/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录:CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
中华实验外科杂志2013年第06期

联合位点突变的乙肝病毒核心启动子转染L-02及对细胞增殖能力的影响

颜见;胡昆鹏;林继宗;姚志成;钟跃思;李明亮;陈骋;许瑞云;邓美海

关键词:核心启动子, 乙肝病毒, 慢病毒载体, 联合突变
摘要:目的 通过基因合成A1762T/G1764A/T1753A/T1768A联合突变后的核心启动子(CM-HBX),再以慢病毒感染的方式构建稳定表达核心启动子的L-02细胞株,建立肝癌发生的细胞模型.方法 通过基因合成的方法,合成A1762T/G1764A/T1753A/T1768A联合突变后的核心启动子,在N末端加上标记序列HBX-Flag,分别双酶切pLenO-RTP载体和pUC57-CM-HBX,纯化酶切产物后进行定向连接,得到重组质粒pLenO-RTP-CM-HBX.钙转法将重组质粒转入293T细胞进行病毒包装然后转染肝细胞.噻唑蓝(MTT)比色法检测转染后细胞增殖能力的变化,Western blot法检测HBX-Flag在慢病毒感染后L-02中的表达以及转染后细胞内S期激酶相关蛋白2(Skp2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、p21、p53的表达的变化.结果 构建pLenO-RTP-CM-HBX核心启动子慢病毒载体可以效率较高地感染L-02(>95%),并在细胞内转录、翻译、合成HBX-Flag,随着培养时间的延长,红色荧光强度无明显变化;同空载组和空白对照组比较,联合突变组L-02的增殖能力明显增强(P<0.05),Skp2、PCNA表达增加,p21、p53表达降低(P<0.05).而空载组和空白对照组的各指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 慢病毒载体pLenO-RTP-CM-HBX核心启动子成功转染L-02,转染后的L-02具有癌变倾向.