期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
抗凋亡Bag-1基因RNA干扰载体构建及内源性筛靶研究
孙念峰；田爱玲；徐伯栋；田玉玲；胡三元
关键词：RNA干扰, BAG-1基因, 基因治疗, 结肠癌
摘要：目的 构建Bag-1短发卡RNA(shRNA)干扰载体并通过内源性筛靶实验检测Bag-1基因mRNA和蛋白的表达,筛选出佳的干扰靶序列.方法 应用干扰技术构建Bag-1 shRNA干扰载体,在细胞转染预实验中将构建好的带有绿色荧光蛋白的质粒转染Lovo细胞,通过观察绿色荧光蛋白来判断转染的效率,分别应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测Bag-1在LoVo细胞中的表达.在shRNA干扰序列筛选实验中,通过定量PCR和Western blot法来检测构建的干扰载体在LoVo细胞中的表达.结果 重组质粒分别经双酶切分析,琼脂糖凝胶电泳鉴定可见清晰地切出与Bag-1及pGPHl/GFP/Neo载体大小相符的片段并与DNA Marker相符.用带绿色荧光基因的pGPH1/GFP/Neo-shNC质粒转染LoVo细胞,在转染后的第24、48及72小时分别观察到逐渐增强的绿色荧光蛋白的表达.分别应用RT-PCR和Western blot法检测Bag-1在LoVo细胞中的表达,可见Bag-1在LoVo细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较高.在Bag-1有效shRNA干扰序列筛选实验中,综合定量PCR及Western blot内源筛靶结果,筛选出Bag-1-homo-825作为佳干扰靶序列.结论 成功构建针对小鼠Bag-1基因的特异性shRNA质粒,获得稳定转染的结肠癌Lovo细胞株,结果证明所构建的pGPH1/GFP/Neo-Bag-1-homo-825作为佳干扰靶序列,显著抑制Lovo细胞Bag-1 mRNA和蛋白的表达.
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