期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
实时荧光定量聚合酶链反应检测B7-H4基因表达的方法学构建
郑晓；吴昌平；吴骏；鲁常青；季枚；徐斌；陈陆俊；蒋敬庭
关键词：B7-H4, 协同刺激分子, 实时荧光定量PCR
摘要：目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法.方法 采用自行设计的检测协同刺激分子B7-H4及内参照基因GAPDH的引物及TaqMan探针,经优化反应体系及反应条件后,检测B7-H4及GAPDH的基因表达.将B7-H4和内参照基因GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确并纯化后分别与pMD19-T载体连接,克隆构建含B7-H4及GAPDH基因片段的重组质粒,作为实时荧光定量PCR检测B7-H4及GAPDH基因表达的标准品.将重组质粒标准品进行定量及梯度稀释,建立标准曲线.结果 PCR扩增产物分别经测序证实为B7-H4及GAPDH基因的特异性片段.该法检测B7-H4基因表达的灵敏度为527 copies/ml,线性范围为5.27×102～5.27×107 copies/ml,标准曲线方程为:Y=-3.1395X+41.805,直线回归相关系数r=0.995,批间变异系数范围为2.39%～3.59%,扩增效率108.2%.该法检测GAPDH基因表达的灵敏度为386 copies/ml,线性范围为3.86×102～3.86×107copies/ml,标准曲线方程为:Y=-3.2436X+41.083,直线回归相关系数r=0.999,批间变异系数范围为2.26%～3.86%,扩增效率103.4%.结论 成功构建实时荧光定量PCR检测协同刺激分子B7-H4基因表达的方法,该方法 特异性好、灵敏度高、重复性好.
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