期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
外源性胃泌素在胃癌细胞增殖和凋亡中的作用
王和明；张泰臻；黄水清；丁航；李义生；袁爱华；张群华；张延龄
关键词：外源性, 胃泌素, 胃癌细胞株, 丙谷胺, 培养液, 小牛血清, 对照组, 胃癌细胞凋亡, 细胞的增殖, 细胞浓度, 比色分析法, 吸光度值, 百分率, 质量分数, 增殖作用, 体积分数, 联合应用, 十二烷基硫酸钠, 培养板, 磷酸盐缓冲液
摘要：我们应用MKN45胃癌细胞株通过四唑蓝(MTT)比色分析法及流式细胞仪观察胃泌素在细胞增殖、凋亡中的作用，同时观察丙谷胺对胃泌素的拮抗作用，并与5-氟尿嘧啶(5-Fu)作比较，结果报道如下。 一、材料与方法 1.细胞培养：MKN45胃癌细胞株(上海市消化疾病研究所提供)培养于RPMI 1640培养液中，加入体积分数为10%小牛血清，置37 ℃5%CO2恒温培养箱，隔天换液，3 d传代。 2.试剂配制及实验分组：用5%的小牛血清的1640液将胃泌素(上海丽珠东风生物技术公司)配为25 mg/L浓度，丙谷胺(江苏金坛制药厂)浓度为32 mg/L，5-Fu浓度为10 mg/L。实验共分5组：空白对照组、胃泌素组、丙谷胺组、胃泌素＋丙谷胺组和5-Fu组。 3.MTT比色分析法：取传代后72 h的细胞，用含10%小牛血清的培养液调整细胞浓度为1× 108个/L，接种于96孔培养板，每孔100 μl，待细胞贴壁后弃去培养液，空白对照组加5 %小牛血清培养液100 μl，胃泌素组加胃泌素液100 μl，丙谷胺组加丙谷胺液100 μl ，胃泌素＋丙谷胺组二者各加50 μl。5-Fu组加5-Fu液100 μl，每组设8个复孔，培养72 h，结束培养前6 h加质量分数为5%MTT(Sigma公司)20 μl/孔，继续培养6 h,离心，弃上清，每孔加质量分数为20%十二烷基硫酸钠(SDS)100 μl，震荡5 min，室温30 min后，在酶标仪上测定570 nm波长处的吸光度值(A)。 4.流式细胞术：传代后72 h细胞用含体积分数为10%小牛血清培养液调整细胞浓度为1×10 9个/L，接种于6孔培养板，每孔1.2 ml，细胞贴壁后弃去培养液，空白对照组加5%小牛血清培养液2.0 ml，胃泌素组加胃泌素液2.0 ml，丙谷胺组加丙谷胺液2.0 ml，胃泌素＋丙谷胺组二者各加1.0 ml。培养48 h后，分别收集每孔细胞，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次，2 ml 1640液制成细胞悬液，测定前离心弃上清，碘化丙啶(PI)染色，ANNEX IN-V(Boehringer mannheim公司)标记，测定凋亡细胞百分率。 5.统计学方法：两组间吸光度值采用t检验；凋亡百分率采用U检验。 二、结果 1.胃泌素对MKN45胃癌细胞的增殖作用：对照组吸光度A值为0.561±0.056；胃泌素组为0.767±0.065与对照组比较，MKN45增殖作用明显加快；丙谷胺组0.556±0.040与对照组间差异无显著性(P＞0.05)；胃泌素联合应用丙谷胺可抑制细胞的增殖［A值为0. 583±0.032，与胃泌素组比较，P＜0.01，但不如5-Fu (0.453±0.045)强( P＜0.01)］。 2.胃泌素对MKN45胃癌细胞凋亡的影响：胃泌素对MKN45细胞的凋亡有明显的抑制作用，胃泌素组细胞凋亡百分率仅为1.39%，明显低于对照组的9.58%(P＜0.01)，联合应用丙谷胺后凋亡增加(表1)。
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