期刊简介
中华医学会主办。本刊是外科学类核心期刊，国家科学技术部中国科技论文统计源期刊，中国生物医学核心期刊，中华医学会外科学分会两本会刊之一，以“探讨理论，更新知识，指导科研，服务临床”为办刊宗旨，其内容包括外科各个专业，是紧密结合临床实践的全国实验外科专业刊物。设有“论坛”、“述评”、“实验研究”、“临床研究”、“新技术与新方法”、“动物模型”、“简报”、“综述”等栏目。创刊28年来，本刊立足外科前沿，评论医学资讯，报道实验外科最新科技成果，内容新颖，信息量大，杂志被引频次与影响因子逐年增加，已成为我国中高级外科医师学术交流的重要园地。
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首页>中华实验外科杂志
- 杂志名称：中华实验外科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1001-9030
- 国内刊号：42-1213/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊)
应用RNA保护分析法观察原发性肝内胆管结石患者肝细胞内葡萄糖醛酸转移酶基因的表达
赵青川；樊代明；陈宝军；李开宗；王德胜
关键词：应用, 保护, 分析法, 原发性, 肝内胆管结石, 患者, 细胞内, 葡萄糖醛酸转移酶, 斑点杂交, 磷酸酶活性, 肝组织, 寡核苷酸探针, 测定, 病人, 放射线, 表达量, 液氮保存, 同位素标记, 样品, 硝酸纤维素膜
摘要：本实验旨在观察肝细胞内影响胆红素代谢的酶--葡萄糖醛酸转移酶(UDP-GT1)活性和基因表达的变化在原发性肝内胆管结石(PIS)中的作用，现将结果报道如下。 一、对象与方法 1.病例选择和标本收集：以术中肝内胆管有褐色易碎结石定为PIS，收集我院1995年1月～1997年12月此类病人36例为患者组，其中男20例，女16例。术中取病变肝叶肝组织液氮保存。收集其他手术患者肝活检标本7例作为正常对照组，其中胆囊息肉患者4例，胃癌3例，肝功能化验均正常，术中取肝活检组织液氮保存，胆汁送细菌培养。 2.肝组织UDP-GT1活性测定：按照Burchell法［1］测定UDP-GT1活性。取正常组病人UDP-GT1均数的1/2值定为UDP-GT1活性异常降低界限。两组病人UDP-GT1 活性降低的人数以百分比表示，进行t检验。参照物的设定：测定肝组织匀浆内葡萄糖-6-磷酸酶活性，以排除因取样或样品保存等因素造成UDP-GT1活性的非特异性改变。 3.UDP-GT1 mRNA表达量的检测：(1)RNA保护分析法：以β-G lobin基因为内参照测定UDP-GT1 mRNA表达量。合成两个寡核苷酸探针，用32P标记：①UDP -GT1探针，5’-CCTGGGCACGTAGGAGAATG-3’(antisense,590～620 bp，针对UDP-GT 1特有的第5个外显子)；②β-Globin探针，5’-ACCACCAACTTCATCC-ACGTTCACC-3’(antisense,64 440～62 266 bp)。杂交方法：异硫氰酸胍提取肝细胞总RN A，取10 μg RNA，同一管中加入同位素标记的UDP-GT1和β-Globin两种探针，液相杂交后加RnaseS1消化掉未杂交上的RNA，聚丙酰胺变性胶电泳，放射自显影，切下放射性条带用2C-201型放射测量仪，测定放射线计数。UDP-GT1 mRNA丰度的判定以β-Globin为内对照，所测UDP-GT1放射线计数与β-Globin放射线计数之比为该基因的相对丰度。(2) 斑点杂交：探针制备：UDP-GT1质粒(荷兰Bosma教授惠赠)扩增后利用EcorR1酶切，切下的一段700 bp片段，用地高辛标记及杂交试剂盒(Boehringer Mannheim公司)进行标记和杂交。斑点杂交：分别取每个样品总RNA 5、10、15 μg点于硝酸纤维素膜，进行斑点杂交。U DP-GT1 mRNA表达量的判定以薄层扫描仪对显色的蓝色斑点进行扫描(580 nm波长)，计算出每个样品3个斑点的平均波峰面积，以样本总RNA量为单位，比较各组平均波峰面积。 二、结果 1.肝组织保存质量：正常组肝组织葡萄糖-6-磷酸酶的活性正常，患者组有8例降低，该8例病人不纳入实验结果统计，以排除因取样或样本保存不当所造成的实验误差。患者组实际纳入统计的病人只有28例。
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